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小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽ELISA試劑盒說明書
一、產(chǎn)品概述
小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)ELISA試劑盒是用于定量檢測小鼠血清、血漿或其他相關(guān)生物樣品中小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽濃度的體外診斷試劑。本試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)原理,具有高靈敏度、高特異性和操作簡便等特點,適用于科研實驗、臨床診斷以及藥物研發(fā)等領(lǐng)域。
二、產(chǎn)品組成
1. 預(yù)包被PINP抗體的96孔板
2. PINP標(biāo)準(zhǔn)品(凍干粉)
3. PINP檢測抗體
4. 辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗
5. 顯色液A(TMB)
6. 顯色液B(H?O?)
7. 終止液(2N H?SO?)
8. 濃縮洗滌液(20倍)
9. 樣本稀釋液
10. 酶標(biāo)儀用覆蓋膜
11. 試劑盒說明書
三、保存與運輸
1. 試劑盒應(yīng)儲存于2-8℃避光環(huán)境中,有效期為XX個月。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品、檢測抗體、二抗和酶標(biāo)板切勿反復(fù)凍融。
3. 運輸過程中應(yīng)保持試劑盒低溫狀態(tài),避免陽光直射和劇烈震動。
四、檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測小鼠血清或血漿中的PINP。將PINP抗體包被于96孔板上,加入待測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品,樣本中的PINP與包被抗體結(jié)合,再加入PINP檢測抗體,形成抗體-PINP-抗體復(fù)合物,最后加入HRP標(biāo)記的二抗,通過顯色反應(yīng),利用酶標(biāo)儀測定OD值,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣本中PINP的濃度。
五、操作步驟
1. 準(zhǔn)備工作:提前30分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。用蒸餾水或去離子水將洗滌液稀釋至工作濃度。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品制備:用樣本稀釋液將PINP標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 加樣:分別將不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液和待測樣本加入孔板中,每孔100μL,設(shè)置空白對照孔,輕搖混勻。
4. 溫育:用封板膜封板后,置37℃溫育30分鐘。
5. 洗滌:揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μL,空白孔除外。
7. 溫育:再次用封板膜封板后,置37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌:重復(fù)步驟5的洗滌操作。
9. 顯色:每孔先加入顯色液A 50μL,再加入顯色液B 50μL,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘。
10. 終止:每孔加終止液50μL,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
六、結(jié)果計算與判斷
1. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品OD值和對應(yīng)濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程。
2. 將待測樣本的OD值代入回歸方程,計算出待測樣本中PINP的濃度。
3. 結(jié)果判斷:根據(jù)正常參考值范圍,判斷待測樣本中小鼠PINP的水平是否正常。
七、注意事項
1. 嚴格按照操作步驟進行,避免交叉污染。
2. 洗滌過程中要充分拍干孔板,避免殘留洗滌液影響實驗結(jié)果。
3. 顯色反應(yīng)時間應(yīng)嚴格控制,避免顯色時間過長或過短導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。
4. 若樣本濃度超出線性范圍,需適當(dāng)稀釋后重新測定。
5. 試劑盒為一次性使用產(chǎn)品,不可重復(fù)使用。
八、臨床意義
小鼠Ⅰ型膠原氨基端延長肽(PINP)是骨形成過程中的重要標(biāo)志物之一,其濃度的變化可反映骨代謝的狀態(tài)。因此,通過檢測小鼠血清或血漿中的PINP濃度,可評估小鼠的骨代謝狀況,為骨質(zhì)疏松、骨折等疾病的診斷、治療和預(yù)防提供重要依據(jù)。
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